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Capacidades de citometría de flujo espectral

La tecnología de espectro completo ha llevado la citometría de flujo al siguiente nivel de rendimiento y flexibilidad, brindando capacidades de inmunofenotipado profundo con una resolución excepcional.
  • Separación espectral para un inmunoperfilado más profundo

  • Diseño intuitivo de paneles para personalizar paneles

  • Extracción de autofluorescencia para mejorar la sensibilidad y la resolución

¿Cómo funciona la citometría de flujo espectral?

La citometría de flujo espectral ofrece capacidades analíticas y de recopilación óptica únicas que permiten el uso de una amplia gama de combinaciones de fluorocromos sin reconfigurar el sistema para cada aplicación, lo que da como resultado una sensibilidad excepcional con operaciones simples e intuitivas. Se generan firmas de espectro completo para cada fluorocromo unido a marcadores celulares que se utilizan para identificar diferentes tipos de células. Las diferentes firmas presentes en una muestra multicolor se desmezclan para permitir el uso de fluorocromos con picos de emisión cercanos en la misma muestra. Esta expansión en las opciones de fluorocromo y el potencial de tamaño del panel, junto con el sistema de fluidos alimentado por vacío, hace que la citometría de flujo espectral Cytek® Aurora sea particularmente adecuada para estudios en los que se buscan firmas de biomarcadores únicas o la disponibilidad de muestras es limitada.

En un citómetro de flujo convencional, el azul pacífico y el violeta brillante 421 (BV421) no se pueden usar juntos ya que las firmas espectrales son demasiado similares.


En un citómetro de flujo convencional, el azul pacífico y el violeta brillante 421 (BV421) no se pueden usar juntos ya que las firmas espectrales son demasiado similares. En citometría de flujo espectral, el azul pacífico y BV421 tienen suficientes distinciones (un índice de complejidad de 0,78) en sus firmas espectrales para ser utilizados en combinación.

Ventajas de la citometría de flujo espectral
 

Más detección

5 láseres con 64 detectores de fluorescencia

Mayor flexibilidad

Uso de una amplia gama de nuevas combinaciones de fluorocromo sin necesidad de reconfigurar los filtros ópticos

Sensibilidad excepcional

  • Separación de fluorocromo con picos de emisión cercanos
  • Uso de la extracción de autofluorescencia para mejorar la claridad de los datos

Más colores

Detección de hasta 40 tipos de células/dianas diferentes en la misma muestra multicolor

Sistema de alto valor

Conjuntos de datos más grandes generados a partir de tamaños de muestra más pequeños

Tecnología avanzada con total compatibilidad analítica y flujos de trabajo familiares

La citometría de flujo espectral ofrece varias ventajas sobre la citometría de flujo convencional y, al mismo tiempo, es susceptible de análisis complejos de datos de citometría de flujo multiparámetros, como el análisis t-Distributed Stochastic Neighbor Embedding (tSNE) que permite un análisis imparcial de todos los marcadores en el panel para ayudar a discernir los cambios fenotípicos dentro de los subconjuntos celulares que de otro modo pasarían desapercibidos. La citometría de flujo espectral tiene todas las capacidades de la citometría de flujo convencional, sigue el mismo flujo de trabajo y comparte los mismos requisitos, al tiempo que amplía sus funcionalidades.

4T1-Luc2-1A4 Análisis de tSNE El trazado de poblaciones de compuerta tradicionales sobre el mapa tSNE permite la visualización de cambios en la expresión de cualquier marcador de panel (cambios de población) entre grupos de tratamiento

    Tecnología avanzada con total compatibilidad analítica y flujos de trabajo familiares

    Grandes conocimientos a partir de pequeñas muestras

    Nuestro equipo experto en citometría de flujo puede realizar una investigación profunda de inmunofenotipado de su estudio in vivo para capturar los cambios que ocurren en la respuesta inmune desencadenada por el tratamiento con agentes de prueba. A continuación se muestra una lista de nuestros paneles espectrales estándar. Estos paneles tienen la capacidad de agregar marcadores adicionales y se pueden desarrollar paneles completamente personalizados para sus necesidades de ensayo.

    Proporciona un análisis inmunofenotípico de 19 subconjuntos mieloides distintos

    Anticuerpo/colorante

    Descripción

    CD45

    Marcador celular panhematopoyético

    CD45 (ratón)

    Exclusión de células inmunitarias de ratón

    CD3

    Marcador de células T pan-T

    CD4

    Marcador de células T CD4+

    CD8

    Marcador de células T CD8+

    FoxP3

    Marcador de células T reguladoras

    CD56

    Células asesinas naturales/marcador de células T asesinas naturales

    CD16

    Marcador de diferenciación

    CD19

    Marcador de células B

    CD20

    Marcador de células B

    CD11b

    Marcador de linaje panmieloide

    CD68

    Marcador de macrófagos

    HLA-DR

    Marcador de macrófagos M1

    CD163

    Marcador de macrófagos M2

    CD14

    Marcador de monocitos

    CD33

    Delineación mieloide

    CD84

    Marcador MDSC

    CD11c

    Marcador de células dendríticas

    BDCA3 (CD141)

    Marcador de subconjunto DC1

    BDCA1 (CD1c)

    Marcador de subconjunto DC2

    CCD123

    Marcador pDC/marcador basófilo

    CD66b

    Marcador de neutrófilos

    CD15

    Marcador de neutrófilos

    CD86

    Marcador de maduración

    Tinte de viabilidad

    Exclusión de células muertas

    Proporciona recuentos absolutos, cuantificación de 13 subconjuntos linfoides y mieloides, mediciones de células T de memoria y análisis de 12 marcadores funcionales para perfilar fenotipos de células T, células dendríticas, macrófagos y MDSC

    Panel 1: Anticuerpo/colorante

    Descripción

    CD45

    Marcador celular panhematopoyético

    CD3

    Marcador de células T pan-T

    CD4

    Marcador de células T CD4+

    CD8

    Marcador de células T CD8+

    FoxP3

    Marcador de células T reguladoras

    CD25

    Marcador de células T reguladoras

    CD44

    Activación/Marcador de memoria

    CD62L

    Célula T virgen/marcador de memoria

    PD-1

    Marcador de activación/agotamiento

    CD69

    Marcador de activación

    LAG-3

    Marcador de activación/agotamiento

    TIM-3

    Marcador de agotamiento

    ICOS

    Marcador de activación

    Granzima B

    Marcador de citotoxicidad

    CKi-67

    Marcador de proliferación

    CD49b/CD335

    Células asesinas naturales/marcador de células T asesinas naturales

    CD19

    Marcador de células B

    CD11b

    Marcador de linaje panmieloide

    Ly-6G

    Marcador granulocítico-MDSC/ Neutrófilo

    Ly-6C

    Marcador de MDSC monocíticos/Monocitos

    CD11c

    Marcador de células dendríticas

    CD24

    Delineación de células dendríticas

    F4/80

    Marcador pan-macrófago

    MHC Clase II

    Marcador de macrófagos M1 y células dendríticas

    CD206

    Marcador de macrófagos M2

    CD103

    Marcador de subconjunto DC1

    XCR1

    Presentación cruzada/Marcador de células dendríticas migratorias

    CD80

    Marcador de maduración 

    CD86

    Marcador de maduración

    MARG1

    Marcador funcional mieloide

    iNOS

    Marcador funcional mieloide

    PD-L1

    Inmunosupresión

    Tinte de viabilidad

    Exclusión de células muertas

     

    Panel 2: Anticuerpo/tinte

    Descripción

    Recuento de perlas de fluorosfera

    Reactivo de enumeración de células

    CD45

    Marcador celular panhematopoyético

    Tinte de viabilidad

    Exclusión de células muertas

    Proporciona un análisis fenotípico profundo en subconjuntos de células T, NK y B, combinando 11 marcadores de activación y agotamiento. Se incluye la delineación de los subconjuntos de memoria de células madre vírgenes, memoria central, memoria efectora, efector terminal y memoria residente tisular (Trm).

    Anticuerpo/colorante

    Descripción

    CD45

    Marcador celular panhematopoyético

    CD3

    Marcador de células T pan-T

    CD4

    Marcador de células T CD4+

    CD8

    Marcador de células T CD8+

    TCRgd

    Marcador de células T gamma delta

    FoxP3

    Marcador de células T reguladoras

    CD25

    Marcador de activación/regulación de células T

    CD69

    Marcador de activación

    LAG3

    Marcador de activación/agotamiento

    CD27

    Marcador de activación

    ICOS

    Marcador de activación

    TIM3

    Marcador de agotamiento

    PD-1

    Marcador de activación/agotamiento

    TIGIT

    Marcador de agotamiento

    TCF7

    Marcador de agotamiento

    Granzima B

    Marcador de citotoxicidad

    CXCR5

    Reclutamiento de células T

    CXCR3

    Reclutamiento de células T

    CD56

    Células asesinas naturales/marcador de células T asesinas naturales

    CD16

    Células asesinas naturales/marcador de células T asesinas naturales

    CD19

    Marcador de células B

    CD20

    Marcador de células B

    Ki-67

    Marcador de proliferación

    CD45RA

    Delineación de células T de memoria

    CD45RO

    Delineación de células T de memoria

    CCR7

    Delineación de células T de memoria

    CD62L

    Delineación de células T de memoria

    CD95

    Delineación de células T de memoria

    CD103

    Delineación de células T de memoria

    Tinte de viabilidad

    Exclusión de células muertas

    Preguntas frecuentes sobre las capacidades de citometría de flujo espectral

    La citometría de flujo espectral presenta ventajas únicas sobre la citometría de flujo convencional en los siguientes escenarios:

    • Cuando la disponibilidad de muestras es limitada
    • Cuando se necesita un inmunoprofiling profundo para analizar hasta 40 objetivos
    • Al analizar tipos de muestras con alta autofluorescencia, como el tejido pulmonar
    • Cuando se buscan firmas de biomarcadores únicos
    • Cuando es necesario analizar partículas tan pequeñas como 100 nm

    Disponemos de paneles de inmunofenotipado espectral tanto para muestras humanas como de ratón:

    • Panel espectral de humanos CompLeukocyte™
    • Panel espectral de humanos CompLymphocyte™
    • Paquete de CompLeukocyte™ expandido espectral (murino)
    • Los paneles validados por Cytek® también se pueden utilizar como se indica aquí cytekbio.com/collections/kits

    Los colorantes que emiten en el rango de 365-829 nm se pueden capturar de manera eficiente con las matrices de semiconductores de multiplexación por división de longitud de onda gruesa de alta sensibilidad.