Eficacia regulatoria para ensayos adicionales
Pruebas de plasma, hepatocitos y microsomas
Evaluación integral de la estabilidad de los medicamentos
Estos estudios se utilizan para medir la vida media de los compuestos, calcular el aclaramiento intrínseco y predecir los perfiles farmacocinéticos humanos en previsión de los primeros ensayos en humanos.
Método para la estabilidad metabólica
Estabilidad metabólica en hepatocitos
El artículo de prueba se incuba a dos concentraciones con aproximadamente 1 x 106 hepatocitos/ml suspendidos en el Medio E de William durante un máximo de 5 momentos temporales y se detiene mediante la adición de disolvente orgánico.
Las incubaciones de control se realizan en el medio de incubación solo para determinar la estabilidad del artículo de prueba en condiciones de incubación. La integridad metabólica de cada lote de hepatocitos se evalúa con 7-etoxicumarina u otro marcador adecuado.
Estabilidad metabólica en plasma
El artículo de prueba se incuba a dos concentraciones en plasma durante un máximo de 5 puntos de tiempo y se detiene mediante la adición de un disolvente orgánico. Las incubaciones de control positivo incluyen procaína (hidrolizada por carboxilesterasa) u otro marcador metabólico adecuado.
Estabilidad metabólica en microsomas
El artículo de prueba se incuba a dos concentraciones con microsomas (0,5 mg/ml de proteína) en presencia de NADPH durante un máximo de 5 puntos de tiempo y se detiene mediante la adición de un disolvente orgánico. Las incubaciones de control se realizan en ausencia de NADPH para determinar la estabilidad del artículo de prueba en condiciones de incubación.
La integridad metabólica de cada lote de microsomas se evalúa para las enzimas de fase 1 utilizando 7-etoxicumarina u otro marcador adecuado.
Análisis de muestras
Las muestras de incubación se analizan para el artículo de prueba restante utilizando un método analítico de cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS). A continuación, se determina el porcentaje de artículo de prueba restante en las muestras en comparación con la concentración inicial. Tras la aprobación, las muestras seleccionadas pueden analizarse más a fondo para caracterizar o identificar metabolitos mediante LC-MS.
Estos ensayos proporcionan información sobre la estabilidad del fármaco (calculada en la vida media y el aclaramiento intrínseco) utilizando fracciones celulares o subcelulares. Un análisis adicional de las incubaciones para el perfil y la identificación de metabolitos puede dilucidar las vías de biotransformación y permitir una mejor comparación entre las especies de prueba preclínicas y los metabolitos humanos.
